PEG/LiAc配套試劑

● 產(chǎn)品規(guī)格

● 產(chǎn)品說(shuō)明

 PEG是一種高分子聚合物，只有分子量達(dá)到3000左右的PEG才會(huì)發(fā)揮大的轉(zhuǎn)化促進(jìn)作用。

酵母感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化所需PEG分子量為4000，可促進(jìn)酵母轉(zhuǎn)化效率達(dá)到10³-10⁵ cfu/μgDNA。PEG在酵母轉(zhuǎn)化中起到在高濃度LiAc環(huán)境中保護(hù)細(xì)胞膜，減少LiAc對(duì)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)損傷的作用；同時(shí)PEG可促使質(zhì)粒更緊密貼附酵母細(xì)胞壁。LiAc可使酵母細(xì)胞產(chǎn)生一種短暫的感受性狀態(tài)，此時(shí)酵母能夠攝取外源性DNA。

PEG/LiAc配套試劑是青旗生物生產(chǎn)的酵母感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化所必需的配套試劑，每個(gè)轉(zhuǎn)化反應(yīng)需要500 µl PEG/LiAc。

● 操作方法

1. Carrier DNA 在每次使用前要通過(guò)加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài)，步驟如下：Carrier DNA 放95℃水浴或金屬浴3 min，快速插入冰中，靜置3 min，再次放95℃水浴或金屬浴3 min，快速插入冰中，靜置3 min以上。

2. 取100 µl冰上融化的酵母感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5 µg，Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打幾次混勻，30℃水浴30 min (15 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

3. 將管放42℃水浴15 min (7.5 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

4. 5000 rpm離心 40 s棄上清，ddH₂O 400 µl 重懸，離心 30s棄上清。

5. ddH₂O 50 µl重懸，涂板，29℃培養(yǎng)48-96 h。

● 注意事項(xiàng)

1. PEG長(zhǎng)時(shí)間靜置易沉淀，在每次使用前務(wù)必?fù)u晃，使試劑中各組分分布均勻。

2. PEG/LiAC 可在4℃長(zhǎng)時(shí)間保存。